2.2.4.1. Blutentnahmetechnik und Probeumgang

Hegstad et al. (1990) berichten jedoch von Unterschieden in der Behandlung der Blutproben,
die der ACTH-Quantifizierung vorausgehen und die Meßergebnisse beeinflussen können.
ACTH wird von Glasoberflächen absorbiert und durch proteolytische Enzyme im Vollblut
sowie Plasma abgebaut. Die Halbwertzeit von ACTH beträgt nur 4-8 Minuten (Froin et al.,
1998).
Beim Zerfall entstehen ACTH-ähnliche Fragmente, die bei der Analyse erfaßt werden können und solche, die nicht gemessen werden (Dopouy et al., 1985). Des weiteren ähnelt die
AS-Sequenz von α-MSH und CLIP der von ACTH, so dass auch diese Peptide zum Teil mitgemessen werden (Couëtil et al., 1996). Hieraus resultieren falsch hohe bzw. falsch
niedrige ACTH-Konzentrationen.
Die Temperatur beim Transport der Proben sowie die
anschließende Lagerungstemperatur sind bezüglich des enzymatischen Abbaus des ACTHs
ebenfalls von großer Bedeutung. Eine niedrige Temperatur (-22 °C) wirkt sich stabilisierend
auf das ACTH aus, die Abbaurate liegt hierbei unter 10% (Brüns, 2001).
Um den enzymatischen Abbau des ACTHs so gering wie möglich zu halten, empfiehlt Brüns
(2001) folgende Vorgehensweise beim Probeumgang und -transport unter Feldbedingungen:
Das Blut sollte in Polypropylen-Röhrchen, die mit 1,2-2,0 mg EDTA/ml Probevolumen
versetzt sind, aufgenommen werden. Unmittelbar nach der Blutabnahme sollte der Zusatz von
500 KIE Aprotinin/ml Blut (entsprechend 25 μl Aprotinin/0,5 ml Blut) erfolgen. Da Aprotinin
(Trasylol® 500.000 KIE, Bayer Vital GmbH, Leverkrusen) ein Proteasenhemmer ist, wird der
ACTH-Abbau verhindert. Das Abzentrifugieren und Einfrieren des Plasmas sollte innerhalb
30-60 Minuten vollzogen sein. Wenn kein Aprotinin zur Verfügung steht, sollte entsprechend
mehr Wert auf die schnellstmögliche Zentrifugation und das Einfrieren des Plasma gelegt
werden.

naja, Halbwertszeit von 6 min heißt doch,
4-6 Minuten
dass nach 6 min nur noch 50% vom ürsprünglichen Wert vorhanden sind, nach 30 min wären's dann nur noch 3%, oder?
Ist im Prinzip so eine Milchmädchenrechnung.
Gibt da ein tolles Rechenbesisipiel zu, bei dem der Schnelle Hase den langsamen Igel mit 10m Vorsprung nie einholen kann, rein rechnerisch.
Fakt ist, dass eine unstabilisierte Probe nach 4-6 Minuten unbrauchbar ist und das selbst bei emperaturen von 22Grad Minus die Werte verfälscht werden, wobei der Zeitraum bis diese Temperatur vernachlässigt wurde.
Nach 24 h dürfte bei den Proben ohne Stabilisator und ohne Kühlung eigentlich kein Wert mehr messbar sein, die bei diesen Bedingungen ermittelten Werte waren aber nur ca 20% niedriger als die bei -22°C mit Stabilisator. Das hab ich mir dann halt mit den miterfassten Zerfallsprodukten erklärt.
richtig, und auch diese sind komplett wertlos